EHA101 - EHA101

EHA101 byl jedním z prvních a nejpoužívanějších Agrobacterium pomocný plazmid pro přenos rostlinných genů. Vytvořeno v roce 1985 v laboratoři Mary-Dell Chilton na Washingtonská univerzita v St. Louis, byl pojmenován po Absolvent kdo to postavil. EH znamená „Elizabeth Hood“ a A pro „Agrobacterium". Pomocný kmen EHA101 je derivátem hypervirulátu A281 A. tumefaciens kmen, který způsobuje velké, rychle rostoucí nádory solanaceous rostliny.[1][2] Tento kmen se používá k přenosu genů, které nás zajímají, do mnoha stovek druhů rostlin po celém světě.

Pro neposlušný plodiny jako např kukuřice, pšenice, a rýže se pro přenos genů často používají pomocné kmeny EHA.[3][4][5] Tyto kmeny účinně podporují přenos T-DNA z důvodu hypervirulence virové geny[2] což naznačuje, že u těchto „těžko transformovatelných“ plodin lze dosáhnout vyšší úspěšnosti kultivary.

Chromozomální pozadí EHA101 je C58C1, vytvrzený nopalin kmen.[1] Pomocné kmeny byly odvozeny od A281, což je A136 (pTiBo542). A281 byl geneticky upraven prostřednictvím dvojité křížené, místně řízené delece, čímž se získal EHA101, kmen s deletovanou T-DNA, který je užitečný pro přenos cílového genu do rostlin.[2] EHA101 je odolný vůči kanamycin pomocí genu npt I místo T-DNA. Mateřský kmen A281 se neukazuje odolnost vůči antibiotikům na vyšších úrovních než obvykle A. tumefaciens kmeny. Kromě toho jiné transkonjugantní kmeny v pozadí C58C1 nevykazují tyto zvýšené rezistence vůči antibiotikům. Tyto charakteristiky tedy nejsou pouhým projevem chromozomálního pozadí, ale pravděpodobně interakcí tohoto Ti plazmidu a C58 chromozomálního pozadí.

Gen npt I namísto T-DNA v EHA101 vyžaduje, aby binární plazmidy, které jsou vloženy do kmene, kódovaly rezistenci na jiné léky než kanamycin. Kmeny EHA105 byly generovány z EHA101 až místně smazané genu pro rezistenci na kanamycin z Ti plazmidu, jinak jsou kmeny identické.[6] Tento druhý kmen byl užitečný pro rostlinné biotechnology, kteří používají kanamycin jako selekční marker na svých binárních plazmidech.

Reference

  1. ^ A b Sciaky, D .; Montoya, A.L. & Chilton, M.-D. (1991). "DNA transformující kompetentní genomová knihovna Arabidopsis v Agrobacterium". Přírodní biotechnologie. 9: 963–967. doi:10.1038 / nbt1091-963.
  2. ^ A b C Hood, E.E .; Helmer, G.L .; Fraley, R.T. & Chilton, M.D. (1986). „Hypervirulence Agrobacterium tumefaciens A281 je kódována v oblasti pTiBo542 mimo T = DNA“. Journal of Bacteriology. 168: 1291–1301. PMC  213636. PMID  3782037.
  3. ^ Hiei, Y .; Ohta, S .; Komari, T. & Kumashiro, T. (1994). "Efektivní transformace rýže (Oryza sativa L.) zprostředkovaná Agrobacerium a sekvenční analýza hranic T-DNA". The Plant Journal. 6 (2): 271–282. doi:10.1046 / j.1365-313x.1994.6020271.x. PMID  7920717.
  4. ^ Ishida, Y .; Saito, H .; Ohta, S .; Hiei, Y .; Komari, T. & Kumashiro, T. (1996). "Vysoce účinná transformace kukuřice (Zea mays L.) zprostředkovaná Agrobacterium tumefaciens". Přírodní biotechnologie. 14: 745–750. doi:10.1038 / nbt0696-745. PMID  9630983.
  5. ^ Frame, B.R .; Shou, H .; Chikwamba, R.K .; Zhang, Z .; Xiang, C .; Fonger, T.M .; Pegg, S.E.K .; Li, B .; Nettleton, D.S. & Pei, D. (2002). „Transformace embryí kukuřice zprostředkovaná Agrobacterium tumefaciens pomocí standardního binárního vektorového systému“. Fyziologie rostlin. 129: 13–22. doi:10,1104 / pp,000653. PMC  1540222. PMID  12011333.
  6. ^ Hood, E.E .; Gelvin, S.B .; Melchers, L.S. & Hoekema, A. (1993). "Nové pomocné plazmidy Agrobacterium pro přenos genů do rostlin". Transgenní výzkum. 2: 208–218. doi:10.1007 / BF01977351.