Dounce homogenizátor - Dounce homogenizer

The Dounce homogenizátory, zařízení používaná pro mechanickou lýzu tkání nebo buněk, vynalezl a pojmenoval Alexander Dounce.

Vynalezl a pojmenoval Alexander Dounce[1][2], a Dounce homogenizátor nebo „Douncer“, je válcová skleněná trubice, uzavřená na jednom konci, se dvěma skleněnými tloučky pečlivě specifikovaných vnějších průměrů, určená pro jemné homogenizace z eukaryotické buňky (např. savčí buňky). Dounce homogenizátory se dnes běžně používají k izolaci buněčných organel.

Dva paličky homogenizátoru Dounce (známé jako paličky „volné“ nebo „A“ a „těsné“ nebo „B“) mají pečlivě specifikovaný vnější průměr vzhledem k vnitřnímu průměru válce. Palička "A" (volný) má vůli od stěny válce (~ 0,0025 - 0,0055 palce), zatímco palička "B" (těsná) má vůli (~ 0,0005 - 0,0025 palce).[3] To umožňuje lyžovat tkáň a buňky smykové napětí s minimálním (pokud vůbec) stupněm zahřívání, čímž zůstávají extrahované organely nebo tepelně citlivé enzymové komplexy do značné míry neporušené.

Měkká tkáň (např. Játra savců) se obvykle rozřezá nebo rozbije na menší kousky a umístí do skleněného válce vedle vhodného objemu vhodného lyzační pufr. Homogenizace se provádí definovaným počtem „průchodů“ tloučků, nejprve volným tloučkem, poté těsným tloučkem nahoru a dolů po válci.[4] Typických je pět až deset průchodů. Homogenizátory Dounce se obvykle vyrábějí z borosilikátového skla, jsou však stále křehké a je třeba je používat opatrně. Obzvláště tvrdé nebo tvrdé tkáně by měly být před homogenizací předem homogenizovány.

Eukaryotické buňky s tvrdými buněčnými stěnami, jako např Saccharomyces cerevisiae, nelze přímo lyžovat dounce homogenizátorem, pokud se nejdříve nerozbije buněčná stěna (např lytikáza nebo zymolyáza v případě S. cerevisiae).

Reference

  1. ^ Dounce, A. L.; Monty, K. J .; Pate, S. (1954). "Tvorba gelu buněčných jader izolovaná vylepšeným postupem". FASEB J. 13: 201. ISSN  0014-9446.
  2. ^ Dounce, A. L. (1955). „METODA IZOLACE INTAKTNÍCH MITOCHONDRIÍ A NUCLEI ZE STEJNÉHO HOMOGENÁTU A VLIV MITOCHONDRIÁLNÍHO ZNIČENÍ NA VLASTNOSTI BUNKY NUCLEI“. The Journal of Cell Biology. 1 (2): 139–153. doi:10.1083 / jcb.1.2.139. ISSN  0021-9525. PMC  2223770.
  3. ^ http://www.kimble-chase.com/literature/TissueGrinders.pdf
  4. ^ Dennison, C. (2013). Průvodce izolací proteinů. Zaměření na strukturní biologii. Springer Nizozemsko. p. 42. ISBN  978-94-017-0269-0. Citováno 2019-01-08.