Aktivace bazofilů - Basophil activation
Alergické příznaky jsou způsobeny počáteční systémovou histamin uvolnit do aktivován bazofily a žírné buňky, což může vést k šoku s otok hrtanu, obstrukce dolních dýchacích cest a hypotenze. Z tohoto důvodu jsou bazofily se žírnými buňkami považovány za klíčové buňky při alergických onemocněních.
Proces aktivace
Imunoglobulin E (IgE ) je třída protilátek (nebo „izotypů“ imunoglobulinu), která byla nalezena pouze u savců. Hraje důležitou roli při alergii a je zvláště spojován s typem 1 přecitlivělost. Existují receptory (FcεR) pro konstantní oblast IgE, Fc region na několika typech buněk, včetně mastocytů a bazofilů. Bazofily obsahují uvnitř buňky mnoho granulí, které jsou naplněny různými účinnými látkami vyvolávajícími alergickou reakci po degranulaci. Buňky se aktivují a zahájí degranulaci, když se IgE protilátka naváže na alergen, který se může vázat na specifickou variabilní oblast IgE, Fab region, vázat na Fc receptor
In vitro metoda testování na alergii
Ve většině případů se při identifikaci alergií používá pozitivní kožní test, ale aktivace bazofilních granulocytů s anti-IgE, exprese antigenu CD63 na povrchu buňky (plazmatická membrána) umožňuje identifikaci alergenu odpovědného za reakci přecitlivělosti bez provedení společného test poškrábání. Pro tento experiment je zapotřebí pouze malé množství krve, což usnadňuje jeho používání, protože je možné jej provádět souběžně s běžnou kontrolou krve. Může být použit pro různé alergie (např. včelí jed, léky, kontrastní média[1]).
Degranulace
Expozice degranulovaných buněk CD63[2] molekuly na jejich vnější buněčné membráně, tedy granule, které na svém vnitřním povrchu obsahují molekuly CD63, splynuly s buněčnou membránou. Vnitřní povrch granulí se během procesu granranulace stává vnějším povrchem bazofilů / žírných buněk.
| materiály | účel |
|---|---|
| BSB | bazofilní stimulace |
| IL-3 | bazofilní stimulace |
| alergen | |
| EDTA | degranulační zátka |
| popisovač | označuje bazofily |
| lyzační roztok | lyžuje červené krvinky |
| odstředivka | točit červené krvinky |
| PBS | odplavení lýzového roztoku |
| FACS | počítání buněk |
Označování a třídění
Tak jako průtoková cytometrie je cenným nástrojem pro analýzu velkého počtu buněk a pro identifikaci buněčných populací, dokonce i při nízkých koncentracích, lze určit procento bazofilů aktivovaných po stimulaci in vitro alergeny a expresi markeru CD63. Značka CD63 je a fluorescein isothiokyanát značený antigen, který se může vázat na protein CD63 a používá se k třídění buněk pomocí FACS (třídění / třídění buněk aktivované fluorescencí). Tento antigen značený FITC vyzařuje světlo na vlnové délce 530 nm. Protože emitovaná fluorescenční intenzita je úměrná vazebným místům každé jednotlivé buňky, intenzita se zvýší podle počtu protilátek konjugovaných s FITC navázaných na buňky exprimující CD63.
Postup
Připraví se zkumavka s bazofilním stimulačním pufrem (BSB) včetně Interleukin 3 a alergen který má být testován. Přidá se vzorek krve a zkumavka se několik minut inkubuje při 37 ° C, aby se zajistilo, že se alergeny mohou vázat na IgE. Přidáváním EDTA do zkumavky se proces degranulace okamžitě zastaví. Po degranulaci se do zkumavky přidá marker CD63 (značené protilátky). Několik minut při teplotě místnosti poskytuje markeru čas na vazbu k proteinům CD63 na buněčné membráně bazofilu. K lýze červených krvinek se provádí krok lýzy. Protože zdaleka převažují leukocyty je třeba je odstranit, aby se provedla FACS analýza bazofilů.
Viz také
Reference
- ^ Böhm I a kol. Pilotní studie aktivace bazofilů vyvolané kontrastním médiem. Fundam Clin Pharmacol 2011; 25: 267 - 276
- ^ Janeway CA, Jr.; et al. (2001). Imunobiologie (5. vydání). Garland Publishing. (elektronický plný text prostřednictvím knihovny NCBI) ISBN 0-8153-3642-X.