Super optimální vývar - Super Optimal Broth

Super optimální vývar (SOB médium) je živina - bohatý na bakterie růstové médium používá mikrobiologická kultura, obecně z Escherichia coli. Byl vyvinut společností Douglas Hanahan v roce 1983 a je upravenou verzí běžně používaného média LB (lysogeny vývar ). Růst E-coli v SOB nebo SOC médiu má za následek vyšší proměna účinnost plazmidy.[1][2]

Super optimální vývar s Represe katabolitů (SOC) je SOB s přidáním glukóza.[3]

Složení

(Čísla v závorkách jsou hmotnosti potřebné k vytvoření 1 litru média)

VZLYK

  • 2% w / v trypton (20 g)
  • 0,5% hmotn./obj. Kvasničný extrakt (5 g)
  • 8,56 mM NaCl (0,5 g) nebo 10 mM NaCl (0,584 g)
  • 2,5 mM KCl (0,186 g)
  • ddH2Ó na 1 000 ml[4]
  • 10 mM MgCl2 (bezvodý: 0,952 g; hexahydrát: 2,033 g) A 10 mM MgSO4 (bezvodý: 1,204 g; heptahydrát: 2,465 g)[2]

SOC

Kromě obsahu SOB obsahuje SOC také 20 mM glukózy (3,603 g)

Alternativně lze SOB a SOC připravit přidáním malého množství koncentrovaného roztoku chloridu hořečnatého a glukózy k předem připravenému SOB.


Úprava pH

Pro maximální efektivitu by média SOB / SOC měla mít své pH upravena na 7,0 přidáním koncentrované hydroxid sodný.[3] Původní literatura uvádí, že pH finálního média by mělo být mezi 6,8 a 7,0.

Sterilizace

Nakonec by mělo být médium SOB autoklávovaný při teplotě 121 ° C zajistit sterilita. Složky média SOC by neměly být autoklávovány společně, protože vysoká teplota může způsobit reakci glukózy s tryptickými peptidy (viz Maillardova reakce ), což zhoršuje kvalitu. Roztoky aditiv SOB a hořčíku a glukózy mohou být autoklávovány samostatně a poté smíchány do konečných koncentrací. Kompletní SOC může být filtrováno sterilizováno přes 0,22 μm filtr.

Reference

  1. ^ Hanahan, D. (1983). "Studie transformace Escherichia coli plazmidy". Journal of Molecular Biology. 166 (4): 557–580. doi:10.1016 / S0022-2836 (83) 80284-8. PMID  6345791.
  2. ^ A b SOC střední
  3. ^ A b [1]
  4. ^ SOC médium