Sephadex - Sephadex
Sephadex je zesítěný dextran gel používá gelová filtrace. Bylo zahájeno uživatelem Pharmacia v roce 1959, po vývojové práci Jerker Porath a Na Flodin.[1][2] Název je odvozen od sepomluva Pharmacia dextran. Obvykle se vyrábí ve formě kuliček a nejčastěji se používá pro gelová filtrace sloupce. Změnou stupně zesíťování lze změnit frakcionační vlastnosti gelu.
Tyto vysoce specializované gelové filtrace a chromatografické média se skládají z makroskopických kuliček synteticky odvozených z polysacharidu dextranu. Organické řetězce jsou zesítěny za vzniku trojrozměrné sítě mající funkční iontové skupiny připojené etherovými vazbami k glukózovým jednotkám polysacharidových řetězců.
Dostupné formy zahrnují aniontové a kationtové měniče i gelové filtrační pryskyřice s různým stupněm pórovitosti; velikosti kuliček spadají do diskrétních rozmezí mezi 20 a 300 µm.
Sephadex se také používá pro iontoměničovou chromatografii[3].
Aplikace
Sephadex se používá k oddělení molekul podle molekulové hmotnosti. Sephadex je rychlejší alternativou k dialýze (solení), vyžaduje faktor s nízkým ředěním (jen 1,4: 1) a vysokou aktivitou. Sephadex se také používá k výměně pufru a odstraňování malých molekul během přípravy velkých biomolekul, jako jsou amfolyty, detergenty, radioaktivní nebo fluorescenční značky a fenol (během čištění DNA).
Speciální hydroxypropylovaný[4] forma pryskyřice Sephadex, pojmenovaná Sephadex LH-20, se používá k separaci a čištění malých organických molekul, jako jsou steroidy, terpenoidy, lipidy. Příkladem použití je čištění cholesterolu.[5]
Frakcionace
Vylučovací chromatografie.
Rozsah frakcionace[6] globulárních proteinů a dextranů (Da).
| Typ gelu | Rozsah frakcionace | |
|---|---|---|
| Kulovitý Proteiny | Dextrans | |
| G-10 | ≤700 | ≤700 |
| G-15 | ≤1500 | ≤1500 |
| G-25 | 1000–5000 | 100–5,000 |
| G-50 | 1500–30,000 | 500–10,000 |
| G-75 | 3000–80,000 | 1000–50,000 |
| G-75 SF | 3000–70,000 | 1000–50,000 |
| G-100 | 4000–150,000 | 1000–100,000 |
| G-100 SF | 4000–100,000 | 1000–100,000 |
| G-150 | 5000–300,000 | 1000–150,000 |
| G-150 SF | 5000–150,000 | 1000–150,000 |
| G-200 | 5000–600,000 | 1000–200,000 |
| G-200 SF | 5000–250,000 | 1000–200,000 |
Iontoměničová chromatografie.
| Popis | Funkčnost | Velikost kuliček (µ) |
|---|---|---|
| Sephadex-CM C-25 | karboxymethyl | 40-120 |
| Sephadex-CM C-50 | karboxymethyl | 40-120 |
| Sephadex-DEAE A-25 | 2- (diethylamino) ethyl | 40-120 |
| Sephadex-DEAE A-50 | 2- (diethylamino) ethyl | 40-120 |
| Sephadex-QAE A-25 | kvartérní aminoethyl | 40-120 |
| Sephadex-QAE A-50 | kvartérní aminoethyl | 40-120 |
| Sephadex-SP C-25 | sulfopropyl | 40-120 |
| Sephadex-SP C-50 | sulfopropyl | 40-120 |
Viz také
Reference
- ^ „Od Sephadexu po GE Healthcare“. chemeurope.com. Archivovány od originál 31. července 2012. Citováno 2. ledna 2019.
- ^ Porath, J; Flodin, P (1959). „Gelová filtrace: metoda odsolování a skupinové separace“. Příroda. 183 (4676): 1657–1659. doi:10.1038 / 1831657a0. ISSN 1476-4687. PMID 13666849. S2CID 32287460.
- ^ „Iontoměničová média Sephadex®“ (PDF). chembio.uoguelph.ca. Pharmacia Biotech.
- ^ GE Healthcare. "Sephadex LH-20". Citováno 2019-12-06.
- ^ Hanukoglu I, Jefcoate CR (1980). „Separace pregnenolonu od cholesterolu pomocí mini-kolon Sephadex LH-20“. Journal of Chromatography A. 190 (1): 256–262. doi:10.1016 / S0021-9673 (00) 85545-4. ISSN 0021-9673.
- ^ „Pokyny pro média Sephadex“ (PDF). gelifesciences.co.jp (návod k produktu). GE Healthcare. 7. dubna 2008. Citováno 2. ledna 2019.