Sekundární děj (kinetika) - Secondary plot (kinetics)

v kinetika enzymů, a sekundární děj používá intercept nebo sklon z několika grafů Lineweaver – Burk k nalezení dalších kinetických konstant.^[1][2]

Například když množina v podle [S] křivek z enzym s ping-pongovým mechanismem (měnící se substrát A, fixovaný substrát B) jsou vyneseny do a Lineweaver – Burkův graf, bude vytvořena sada paralelních linek.

Následující Michaelis – Mentenova rovnice souvisí s počáteční reakční rychlostí proti₀ do Podklad koncentrace [A] a [B]:

${ displaystyle { begin {aligned} { frac {1} {v_ {0}}} & = { frac {K_ {M} ^ {A}} {v _ { max} {[} A {]} }} + { frac {K_ {M} ^ {B}} {v _ { max} {[} B {]}}} + { frac {1} {v _ { max}}} end {zarovnáno }}}$

Průsečík y této rovnice se rovná následujícímu:

${ displaystyle { begin {aligned} { mbox {y-intercept}} = { frac {K_ {M} ^ {B}} {v _ { max} {[} B {]}}} + { frac {1} {v _ { max}}} end {zarovnáno}}}$

Průsečík y se stanoví při několika různých fixních koncentracích substrátu B (a měnícím se substrátu A). Hodnoty průsečíku y se poté zakreslí proti 1 / [B], aby se určila Michaelisova konstanta pro substrát B, ${ displaystyle K_ {M} ^ {B}}$, jak je znázorněno na obrázku vpravo.^[3] Sklon se rovná ${ displaystyle K_ {M} ^ {B}}$ děleno ${ displaystyle v _ { max}}$ a intercept se rovná 1 over ${ displaystyle v _ { max}}$.

Sekundární graf enzymového systému křenová peroxidáza a Ó-Fenylenediamin (s peroxidem vodíku jako druhým substrátem)

Sekundární graf ve studiích inhibice

Sekundární graf může být také použit k nalezení konkrétní konstanty obývání, K_Já.

Pro konkurenceschopné inhibitor enzymu, zdánlivá Michaelisova konstanta se rovná následujícímu:

${ displaystyle { begin {aligned} { mbox {zjevný}} K_ {m} = K_ {m} times left (1 + { frac {[I]} {K_ {I}}} right) end {zarovnáno}}}$

Sklon pozemku Lineweaver-Burk se proto rovná:

${ displaystyle { begin {aligned} { mbox {sklon}} = { frac {K_ {m}} {v _ { max}}} krát vlevo (1 + { frac {[I]} { K_ {I}}} vpravo) end {zarovnáno}}}$

Pokud vytvoříte sekundární graf skládající se z hodnot sklonu z několika grafů Lineweaver-Burk s různou koncentrací inhibitoru [I], lze najít konkurenční konstantu obtěžování. Sklon sekundárního grafu dělený průsečíkem se rovná 1 / K._Já. Tato metoda umožňuje najít K_Já konstantní, i když Michaelisova konstanta a v_max hodnoty nejsou známy.

Reference