Technologie QMCF - QMCF Technology

Technologie QMCF je epizomální produkce bílkovin systém, který používá geneticky modifikovaný savčí buňky a speciálně konstruované plazmidy. QMCF plazmidy nesou kombinaci regulační sekvence z myši polyomavirus (Py) replikace DNA původ, který v kombinaci s Epstein-Barr virus (EBV) EBNA-1 vazebné místo pro proteiny jako prvky retence jader zajišťují stabilní šíření plazmidů v buňkách savců. Navíc vektory nesou značka výběru funkční pro výběr nesoucího plazmidu bakterie a QMCF buňky, bakteriální ColE1 původ replikace a kazeta pro výraz sledovaného proteinu. QMCF buněčné linie vyjádřit Antigen Large-T a proteiny EBNA-1, které se vážou na virové sekvence na QMCF plazmidu a tudíž podporují replikaci a udržování plazmidu v buňkách. Technologie QMCF má několik důležitých rozdílů ve srovnání s běžně známou přechodnou expresí a stabilními expresními systémy buněčné linie. Na rozdíl od přechodného expresního systému umožňuje technologie QMCF udržovat epizomicky replikující se QMCF plazmidy uvnitř buněk po dobu až 50 dnů, což poskytuje možnost pro produkční fázi 2–3 týdny. Proto jsou úrovně produkce technologie QMCF vyšší (až 1 g / l). Dalším rozdílem je možnost stanovení výrazu buněčné banky do jednoho týdne, což u přechodného systému není možné. Ve srovnání s použitím stabilní buněčné linie je technologie QMCF rychlou metodou, která během vývoje buněčné linie vynechává časově náročný krok výběru klonu.

aplikace

Technologie QMCF může být použita pro:

  • produkce bílkovin, protilátky a částice podobné virům pro základní výzkum a farmaceutický vývoj
    • Proces produkce bílkovin začíná klonováním cDNA cílové molekuly do QMCF expresivní vektor. Poté je transfekováno 1-6 ug plazmidiální DNA elektroporace do buněk QMCF (CHO nebo HEK293 buňky) pro expresi v suspenzi bez séra. Protože QMCF plazmidy obsahují odolnost proti antibiotikům gen a jsou schopni stabilně replikovat a zůstat uvnitř dělících se buněk, výběr a růst buněčná kultura koná se. To umožňuje zvýšit produkci na požadovaný objem. Nakonec se proces přepne do produkční fáze změnou teploty média na 30 ° C.
  • konstrukce translokace bílkovin testy pro výzkum a vývoj pro screeningové účely
    • Adherentní buněčné linie QMCF vycházejí z buněk U2OS.

Reference

  • Silla, T .; Haal, I .; Geimanen, J .; Janikson, K .; Abroi, A .; Ustav, E .; Ustav, M. (2005). „Epizomální údržba plazmidů s hybridními původy v myších buňkách“. Journal of Virology. 79 (24): 15277–15288. doi:10.1128 / JVI.79.24.15277-15288.2005. PMC  1316011. PMID  16306599.
  • Evropský patent č. EP1851319[trvalý mrtvý odkaz ]; US patentová přihláška č. 11 / 351,809; nevyřízené patenty v Austrálii, Kanadě a Japonsku

externí odkazy