Zkouška neutralizace redukcí plaku - Plaque reduction neutralization test - Wikipedia

The test neutralizace redukcí plaku se používá ke kvantifikaci titr neutralizace protilátka na virus.

Vzorek séra nebo roztok protilátky, který má být testován, je naředěn a smíchán s virovou suspenzí. To se inkubuje, aby se umožnilo protilátce reagovat s virem. To se nalije přes konfluentní monovrstvu hostitelských buněk. Povrch buněčné vrstvy je pokryt vrstvou agar nebo karboxymethylcelulóza zabránit šíření viru bez rozdílu. Koncentrace jednotky tvořící plaky lze odhadnout podle počtu plakety (oblasti infikovaných buněk) vytvořené po několika dnech. V závislosti na viru se jednotky tvořící plaky měří mikroskopickým pozorováním, fluorescenčními protilátkami nebo specifickými barvivy, které reagují s infikovanými buňkami.[1]

Koncentrace séra ke snížení počtu plaků o 50% ve srovnání s bezsérovým virem poskytuje měřítko množství protilátky nebo její účinnosti. Toto měření se označuje jako PRNT50 hodnota.

V současné době je považován za „zlatý standard“ pro detekci a měření protilátek, které mohou neutralizovat viry způsobující mnoho nemocí.[2][3] Má vyšší citlivost než jiné testy jako hemaglutinace a mnoho komerčních Enzymová imunotest bez kompromisů specifičnost. Navíc je specifičtější než jiné sérologické metody pro diagnostiku některých arbovirů.

Test je však relativně těžkopádný a časově náročný (několik dní) ve srovnání se soupravami EIA, které poskytují rychlé výsledky (obvykle několik minut až několik hodin).

Problémem tohoto testu, který byl nedávno identifikován, je to, že neutralizační schopnost protilátek závisí na stavu zrání virionu a typu buňky použitém v testu.[4] Pokud se tedy pro test použije nesprávná buněčná linie, může se zdát, že protilátky mají neutralizační schopnost, když ji skutečně nemají, nebo naopak, mohou se zdát neúčinné, když skutečně mají neutralizační schopnost.[Citace je zapotřebí ]

Viz také

Reference

  1. ^ Schmidt, NJ; J Dennis; E H Lennette (červenec 1976). „Neutralizační test redukce plaků pro lidský cytomegalovirus založený na zvýšeném příjmu neutrální červeně buňkami infikovanými virem“ (PDF). Journal of Clinical Microbiology. 4 (1): 61–66. ISSN  0095-1137. PMID  182716.
  2. ^ Thomas, Stephen J .; Ananda Nisalak; Kathryn B. Anderson; Daniel H. Libraty; Siripen Kalayanarooj; David W. Vaughn; Robert Putnak; Robert V. Gibbons; Richard Jarman; Timothy P. Endy (listopad 2009). „Neutralizační test redukce plaků dengue (PRNT) u primárních a sekundárních infekcí virem dengue: Jak změny v podmínkách testu ovlivňují výkonnost“. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 81 (5): 825–833. doi:10.4269 / ajtmh.2009.08-0625. ISSN  0002-9637. PMC  2835862. PMID  19861618.
  3. ^ Ratnam, S; V Gadag; R West; J Burris; E Oates; F Stead; N Bouilianne (01.04.1995). "Porovnání komerčních souprav pro enzymové imunotesty s neutralizačním testem redukce plaků pro detekci protilátky proti viru spalniček". J. Clin. Microbiol. 33 (4): 811–815. doi:10.1128 / JCM.33.4.811-815.1995. PMC  228046. PMID  7790442.
  4. ^ Mukherjee, S .; Dowd, K. A .; Manhart, C. J .; Ledgerwood, J. E .; Durbin, A. P .; Whitehead, S. S .; Pierson, T. C. (2014). "Mechanismus a význam neutralizace flavivirů závislých na typu buňky". Journal of Virology. 88 (13): 7210–7220. doi:10.1128 / JVI.03690-13. ISSN  0022-538X. PMC  4054442. PMID  24741083.