Metoda Miles a Misra - Miles and Misra method

Metoda Miles a Misra (nebo povrchově životaschopný počet) je technika používaná v Mikrobiologie určit počet jednotky tvořící kolonie v bakteriální zavěšení nebo homogenizovat. Tato technika byla poprvé popsána v roce 1938 Milesem, Misrou a Irwinem, kteří v té době pracovali v LSHTM.^[1] Ukázalo se, že metoda Miles a Misra je přesná.^[2]

Materiály

• Kalibrovaný pokles pipeta nebo automatická pipeta dodávající kapky 20 μl.
• Petriho misky obsahující živinu agar nebo jiné vhodné médium.
• Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS) nebo jiné vhodné ředidlo.
• Bakteriální suspenze nebo homogenát.

Metoda

• Inokulum / suspenze se sériově ředí přidáním 1x suspenze k 9x ředidla. Pokud není známo množství bakterií, měla by být ředěna nejméně na 10⁻⁸.
• Pro každou sérii ředění jsou zapotřebí tři destičky, ze statistických důvodů jsou zapotřebí průměrně alespoň 3 počty.
• Povrch destiček musí být dostatečně suchý, aby umožnil absorpci kapky 20 μl za 15–20 minut.
• Desky jsou rozděleny do stejných sektorů (na talíř je možné použít až 8). Sektory jsou označeny ředěním.
• V každém sektoru se na povrch agaru nakape 1 x 20 μl příslušného ředění a kapka se nechá přirozeně šířit. V původním popisu metody se kapka z výšky 2,5 cm rozšířila na plochu 1,5 - 2,0 cm. Je důležité nedotýkat se pipety povrchu agaru.
• Destičky se ponechají ve svislé poloze na lavici, aby se před inverzí a inkubací při 37 ° C po dobu 18 - 24 hodin (nebo vhodných inkubačních podmínek s ohledem na použitý organismus a agar) sušily.
• U každého sektoru je pozorován růst, vysoké koncentrace způsobí souvislý růst v oblasti kapky nebo velký počet malých / sloučených kolonií. Kolonie se počítají v sektoru, kde je vidět nejvyšší počet samostatných kolonií v plné velikosti (obvykle se počítají sektory obsahující mezi 2-20 koloniemi).
• Následující rovnice se používá k výpočtu počtu jednotek tvořících kolonie (CFU) na ml z původního alikvotu / vzorku:

CFU na ml = průměrný počet kolonií pro ředění x 50 x ředicí faktor.

Výhody

• Rychlejší než jiné metody.
• Produkujte méně bakteriální kontaminace pracovního povrchu.

Viz také

• Kolonie tvořící jednotka

Reference