Klonování nezávislé na ligaci - Ligation-independent cloning

Klonování nezávislé na ligaci (LIC) je forma molekulární klonování který je možné provést bez použití restrikční endonukleázy nebo DNA ligáza. Technika byla vyvinuta počátkem 90. let jako alternativa ke klonování restrikčními enzymy / ligázami.[1] To umožňuje klonovat geny, které mají restrikční místa, bez obav o sekání vloženého požadovaného genu.[2][3][4][je zapotřebí objasnění ]

Protokol

  1. Navrhněte PCR primery s rozšířením LIC
  2. Proveďte PCR k amplifikaci genu
  3. Očistěte produkt PCR
  4. Vytvořte 5 'převisy
  5. Inkubujte vektor a produkt PCR k hybridizaci
  6. Přeměnit

Reference

  1. ^ „Seamless Cloning | NEB“. www.neb.com. Citováno 2020-01-23.
  2. ^ „Ligation Independent Cloning (LIC)“. New England BioLabs (NEB). Citováno 15. ledna 2016.
  3. ^ „Získejte svůj klon 90% času pomocí ligace nezávislého klonování“. Kousnout Bio. Citováno 2012-05-09.
  4. ^ Haun, RS; Serventi, IM; Moss, J (1992). "Rychlé a spolehlivé ligace nezávislé klonování produktů PCR pomocí modifikovaných plazmidových vektorů". Biotechniky. 13 (4): 515–8. PMID  1362067.

Další čtení