Buňka DH5-Alpha - DH5-Alpha Cell - Wikipedia

Buňky DH5-alfa jsou E-coli buňky navrženy tak, aby se maximalizovaly proměna účinnost. Jsou definovány třemi mutacemi[1] recA1, endA1, které pomáhají inzerci plazmidu a lacZAM15, které umožňují modrá bílá projekce. Buňky jsou kompetentní a často se používá s transformace chloridu vápenatého pro vložení požadovaného plazmidu. Studie čtyř transformačních metod a šesti kmenů bakterií ukázala, že nejúčinnější byl kmen DH5 s Hanahan metoda[2]

Mutace

  • Mutace recA1 je jednobodová mutace, která nahrazuje glycin 160 polypeptidu recA zbytkem kyseliny asparagové[3] za účelem deaktivace činnosti rekombinázy a deaktivovat homologní rekombinace.
  • Mutace endA1 inaktivuje intracelulární endonukleázu, aby zabránila degradaci vloženého plazmidu.

Reference

  1. ^ „Strain - DH5α“. cgsc2.biologie.yale.edu. Citováno 2017-05-23.
  2. ^ Chan, Weng-Tat; Verma, Chandra S .; Lane, David P .; Gan, Samuel Ken-En (12. 12. 2013). „Srovnání a optimalizace metod a faktorů ovlivňujících transformaci Escherichia coli“. Zprávy o biologických vědách. 33 (6). doi:10.1042 / BSR20130098. ISSN  0144-8463. PMC  3860579. PMID  24229075.
  3. ^ Bryant, Floyd (9. listopadu 1987). „Konstrukce mutantního proteinu RecA s deficitem rekombinázy, který si zachovává aktivitu ATPázy závislou na jednořetězcovém DNA“ (PDF). Journal of Biological Chemistry.