Kompenzace (cytometrie) - Compensation (cytometry)

v cytometrie, kompenzace je matematická korekce překrytí signálu mezi kanály emisních spekter různých fluorochromy.[1][2]

The fotony emitované fluorochromy mají různé energie a vlnové délky a podobně průtokové cytometry použití fotonásobiče (PMT) za účelem přeměny fotonů na elektrony, detektor může zaregistrovat signál z více než jednoho fluorochromu. Tím se vytvoří překrytí signálu (přelévání), které nelze odstranit optickým systémem a musí být opraveno elektronicky. Kompenzaci lze provést pomocí různých programů pro průtokovou cytometrii, jako jsou Flowjo, Flowlogic, Kaluza atd. První kompenzaci dat provedl v roce 1977 Michael Loken a kol. během dvoubarevného experimentu, kdy myš splenocyty byly obarveny fluorescein a rodamin.[3]

Přelévání

Když je jedna buňka označena dvěma nebo více fluorochromy, přidaná jasnost jednoho fluorochromu k druhému vytváří významný šum v pozadí a ovlivňuje sílu signálu. Tomu se říká přelévání. Fyzické překrývání různých emisních spekter fluorochromů může aktivovat různé receptory, než jaké jsou určeny pro danou vlnovou délku. Schopnost korigovat to vyplývá ze skutečnosti, že překrytí je lineární funkcí, takže měřený signál může být zprůměrován a tím opraven. Tato oprava se nazývá kompenzace.

Kompenzace je nezbytná, aby bylo možné rozlišovat mezi populacemi buněk. To se provádí měřením spektrálního překrytí různých fluorochromů a použitím naměřených hodnot k vytvoření matice. Matice je poté invertována a udává skutečné hodnoty kompenzace. Průtokový cytometr pak pomocí těchto hodnot opraví překrytí každého detektoru pro každou barvu.[4]

Reference

  1. ^ Roederer, M. (2001-11-01). "Spektrální kompenzace pro průtokovou cytometrii: artefakty vizualizace, omezení a upozornění". Cytometrie. 45 (3): 194–205. doi:10.1002 / 1097-0320 (20011101) 45: 3 <194 :: aid-cyto1163> 3.0.co; 2-c. ISSN  0196-4763. PMID  11746088.
  2. ^ Bagwell, C. B .; Adams, E. G. (1993-03-20). "Kompenzace fluorescenčního spektrálního překrytí pro libovolný počet parametrů průtokové cytometrie". Annals of the New York Academy of Sciences. 677: 167–184. doi:10.1111 / j.1749-6632.1993.tb38775.x. ISSN  0077-8923. PMID  8494206.
  3. ^ Loken, M. R.; Parks, D. R .; Herzenberg, L. A. (červenec 1977). „Dvoubarevná imunofluorescence pomocí fluorescenčně aktivovaného třídiče buněk“. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 25 (7): 899–907. doi:10.1177/25.7.330738. ISSN  0022-1554. PMID  330738.
  4. ^ Roederer, M. (2001-11-01). "Spektrální kompenzace pro průtokovou cytometrii: artefakty vizualizace, omezení a upozornění". Cytometrie. 45 (3): 194–205. doi:10.1002 / 1097-0320 (20011101) 45: 3 <194 :: aid-cyto1163> 3.0.co; 2-c. ISSN  0196-4763. PMID  11746088.

externí odkazy