Odkrytí buňky - Cell unroofing
Odkrytí buňky je některá z různých metod pro izolaci a vystavení buněčná membrána z buňky. Na rozdíl od běžnější membrány extrakční protokoly provádí se s několika kroky centrifugace (cílem je oddělit membránovou frakci od a buněčný lyzát ), v odkrytí buněk cílem je roztrhnout a uchovat skvrny plazmatické membrány za účelem provedení in situ experimenty využívající (mikroskopii a biomedicínská spektroskopie ).
Dějiny
První pozorování dvouvrstvé buněčné membrány bylo provedeno v roce 1959[1] na části buňky pomocí elektronového mikroskopu, ale první mikrofotografie vnitřní strany buňky pochází z roku 1977[2] autor: M.V. Nermut. Profesor John Heuser významně přispěl v této oblasti a zobrazil podrobnou vnitřní strukturu membrány a membrány cytoskelet vázán na to s rozsáhlým využitím elektronového mikroskopu.
To bylo až po vývoji mikroskop atomové síly operoval v kapalině, ve které bylo možné zobrazit buněčné membrány téměř-fyziologické podmínky[3] a otestovat jeho mechanické vlastnosti.[4]
Metody
- Lámání mrazem jednovrstvých[5]
- Rychlé zmrazení, hluboké leptání elektronová mikroskopie a kryofixace[6]
- Sonikace pro mikroskopie atomové síly[7]
- Jednobuněčné zastřešení[4]
Viz také
Reference
- ^ Robertson, J. D. (1959). "Ultrastruktura buněčných membrán a jejich derivátů". Biochem. Soc. Symp.
- ^ Nermut, M. V .; Williams, Lynn D. (1977). „Mrazicí štěpení monovrstev (kapilárních vrstev) buněk, membrán a virů: některé technické úvahy“. Journal of Microscopy. 110 (2): 121–132. doi:10.1111 / j.1365-2818.1977.tb00023.x. ISSN 1365-2818. PMID 335072.
- ^ Cho, Sang-Joon; Ahn, Jeonghun; Youn, Daehwan; Minakata, Shiho; Yoshimura, Azumi; Usukura, Jiro (01.10.2012). „Využití techniky odkrývání pro mikroskopické zobrazování atomové síly intracelulárního cytoskeletu ve vodných podmínkách“. Journal of Electron Microscopy. 61 (5): 321–326. doi:10.1093 / jmicro / dfs055. ISSN 0022-0744. PMID 22872282.
- ^ A b Galvanetto, Nicola (01.12.2018). „Single-cell unroofing: Probing topology and nanomechanics of native membranes“. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - biomembrány. 1860 (12): 2532–2538. arXiv:1810.01643. doi:10.1016 / j.bbamem.2018.09.019. ISSN 0005-2736. PMID 30273580.
- ^ Nermut, M. V .; Williams, Lynn D. (1977). „Mrazicí štěpení monovrstev (kapilárních vrstev) buněk, membrán a virů: některé technické úvahy“. Journal of Microscopy. 110 (2): 121–132. doi:10.1111 / j.1365-2818.1977.tb00023.x. ISSN 1365-2818. PMID 335072.
- ^ Heuser, John (2000). "Výroba 'buněčných kortiků' pro světelnou a elektronovou mikroskopii". Provoz. 1 (7): 545–552. doi:10.1034 / j.1600-0854.2000.010704.x. ISSN 1600-0854. PMID 11208142.
- ^ Usukura, Jiro; Ito, Shuichi; Yagi, Akira; Narita, Akihiro; Usukura, Eiji (06.06.2016). „Metoda odkrytí pro přímé pozorování cytoskeletu při molekulárním rozlišení pomocí mikroskopie atomové síly“. Vědecké zprávy. 6: 27472. doi:10.1038 / srep27472. ISSN 2045-2322. PMC 4895337. PMID 27273367.