Centrifugace s vysokou hustotou - Buoyant density centrifugation

Elektronový mikroskopický obraz psího parvoviru izolovaného pomocí plovoucí hustotní centrifugace

Centrifugace s vysokou hustotou (taky isopycnic centrifugace nebo rovnovážná hustota-gradientní centrifugace) používá koncept vztlak oddělit molekuly v roztoku podle jejich rozdílů v hustotě.

Implementace

Historicky a chlorid česný Roztok (CsCl) byl často používán, ale běžněji používané gradienty hustoty jsou sacharóza nebo Percoll. Vzorek se vloží na horní část roztoku a poté se zkumavka po delší dobu, někdy trvající dny, točí velmi vysokou rychlostí. Molekuly CsCl se hustě shlukují směrem ke dnu, takže se vytvářejí dokonce i vrstvy různé hustoty. Vzhledem k tomu, že původní roztok měl přibližně stejnou hustotu, přecházejí na úroveň, kde jsou jejich hustota a hustota CsCl stejné, až tvoří ostrý výrazný pás.

Roztok chloridu cesného (CsCl) a dva morfologické typy rotavirus. Po centrifugaci při 100 g se v roztoku CsCl vytvoří gradient hustoty a virové částice se oddělí podle jejich hustoty.

Izotopová separace

Tato metoda velmi ostře odděluje molekuly a je tak ostrá, že může dokonce od sebe oddělit různé molekulární izotopy.

Separace DNA

Vztlaková hustota většiny DNA je 1,7 g / cm3, což se rovná hustotě 6M roztoku CsCl. Plovoucí hustota DNA se mění s ní Obsah GC. Termín "satelitní DNA „označuje malé pásy opakujících se sekvencí DNA s odlišným složením báze plovoucí nad (bohatou A + T) nebo pod (bohatou G + C) hlavní složkou DNA.

Viz také

Reference

Další čtení

  • Schildkraut, Carl L .; Marmur, Julius; Doty, Paul (1962). "Stanovení základního složení deoxyribonukleové kyseliny z její vztlakové hustoty v CsCl". Journal of Molecular Biology. 4 (6): 430–443. doi:10.1016 / S0022-2836 (62) 80100-4. ISSN  0022-2836.
  • James Greene (25. června 1998). Principy a metodiky rekombinantní DNA. CRC Press. str. 278–. ISBN  978-0-8247-9989-2.